35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária

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ResumoID:01.1049-1

AREA: Bovinos e Bubalinos: Produção, Reprodução, Clínica e Cirurgia

DETECÇÃO GÊNICA DAS ENZIMAS DA GLICONEOGÊNESE NA PLACENTA DE FÊMEAS BOVINAS

Geila Maria Zanardi (Universidade do Estado de Santa Catarina); Kaio César Simiano Tavares (Universidade do Estado de Santa Catarina); Patrícia Hermes Stoco (Universidade Federal de Santa Catarina); Edmundo Carlos Grisard2 (Universidade Federal de Santa Catarina); Marcelo Bertolini (universidade do Estado de Santa Catarina); Luciana Relly Bertolini (Universidade do Estado de Santa Catarina); Luiz Cláudio Miletti (Universidade do Estado de Santa Catarina)

Resumo

Uma característica singular do desenvolvimento precoce dos mamíferos é a provisão de nutrientes do organismo materno por intermédio da placenta. Para o feto, a placenta consiste na combinação, em apenas um órgão, de muitas atividades funcionais, que no adulto são separadas e, além disso, possui um intenso metabolismo. O objetivo deste estudo é averiguar se a placenta bovina realiza gliconeogênese, que consiste em uma via metabólica capaz de sintetizar D-glicose a partir de compostos que não são carboidratos, como a alanina, lactato, glicerol e ácido propiônico; como também proporcionar informações sobre o metabolismo placentário que poderão ser úteis no entendimento de alterações no suprimento de substratos ao concepto. Um exemplo de tais alterações é a “Síndrome dos Bezerros Absolutamente Grandes”, onde bezerros provenientes da técnica de produção in vitro (PIV) e/ou cultivo in vitro (CIV) de embriões freqüentemente apresentam alto peso ao nascer. Esse crescimento acelerado é especificamente pré-natal e os mecanismos responsáveis pela síndrome são ainda desconhecidos. Neste estudo foi avaliado a expressão gênica na placenta das três enzimas gliconeogênicas: frutose-1,6-bisfosfatase (F1,6B), glicose-6-fosfatase (G6P) e fosfoenolpiruvatocarboxiquinase (PEPCK) nos três terços gestacionais, sendo utilizadas 15 fêmeas bovinas. O RNA total dos fragmentos de placenta foi purificado utilizando-se Trizol (Invitrogen) e a síntese do cDNA (DNA complementar) foi obtida através do Kit Taq PCR DNA Polymerase (Invitrogen) . Para a avaliação da expressão gênica das três enzimas gliconeogênicas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) foram sintetizados seis oligonucleotídeos senso e antí-senso respectivamente, desenhados a partir de seqüências específicas para bovinos (Bos Taurus) obtidos do banco de dados do NCBI: F1,6b - MGC:128145 (TCCTCTCCAATGACCTGGTT) / (CTTTCCACTGGGGCTTTTCT); G6P - MGC:140735 (CTTTTGGTGGGTCCATGAGT) / (GCCGCTCACACCACTTAGAG); PEPCK - MGC:137419 (GGAGGAGGGTGTGATCAAGA) / (GTGGAGGCACTTGACGAACT). Os fragmentos obtidos para cada enzima foram analizados em gel de agarose 1 % e sequenciados para a confirmação da especificidade de amplificação. A análise da expressão gênica através do RT-PCR em placentas bovinas demonstrou a presença de mRNA para as enzimas da gliconeogenese. Após a confirmação da expressão gênica das três enzimas gliconeogênicas, partimos para a análise protéica. Para isso peptídeos da seqüência proteica de cada enzima foram sintetizados e inoculados separadamente em camundongos para obtenção do soro com anticorpos específicos, e em seguida serem utilizados no teste Western Blot que atualmente encontra-se em andamento.

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