ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária</TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária</font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:04.722-3</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>AREA: <b>Microbiologia</b><p align=justify><strong>DETECÇÃO DE FATORES DE VIRULÊNCIA EM ESCHERICHIA COLI ISOLADAS DE INFECÇÕES SUBCLÍNICAS DE MASTITE BOVINA</strong></p><p align=justify><b>Melissa Rodirgues Ribeiro </b> (<i>Escola de Veterinária da UFMG</i>); <b>Geraldo Márcio da Costa </b> (<i>Universidade Federal de Lavras</i>); <b><u>Nivaldo da Silva </u></b> (<i>Escola de Veterinária da UFMG</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2>INTRODUÇÃO A diversidade dos fatores de virulência apresentada por Escherichia coli, em isolados de infecções de glândula mamária, tem chamado a atenção e despertado preocupações quanto ao grau de envolvimento dos mesmos nos mecanismos de infecção que resultam em quadros de mastite bovina. O presente estudo visou à detecção de genes envolvidos na colonização celular da glândula mamária nesses rebanhos utilizando a técnica de PCR Multiplex. MATERIAL E MÉTODOS: Foram trabalhadas 46 amostras de E. coli isoladas de casos subclínicos de mastite em 35 rebanhos bovinos leiteiros da região Sul de Minas Gerais. O DNA foi extraído por fervura a 100°C por 15 minutos, seguido de centrifugação por 5 minutos a 10.000 rpm e o sobrenadante usado diretamente como molde para a realização da PCR (Wani et al., 2003). Os genes stx1, stx2 e eaeA foram detectados utilizando os primers e as condições descritas por China et al. (1996). Para a detecção e amplificação dos genes de interesse foram utilizados para cada reação: 1U de Taq Polymerase (Phoneutria), 5µL de Tampão 10X, 0,5 µL de cada primer (20 pmol), 5 µL de dNTPS e 5µL de DNA bacteriano, com um volume final de 50 µL. Óleo mineral (30 µL) foi adicionado ao topo da mistura. As reações de amplificação foram submetidas a 94ºC por 5 minutos, 30 ciclos de 94ºC por 30 segundos, 50ºC por 30 segundos e 72ºC por 30 segundos em Termociclador. Os produtos de DNA amplificados foram separados por eletroforese em gel de agarose 2% corado com brometo de etídio. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Das 46 amostras analisadas, 24 (52,2%) foram positivas. Dessas, 12 (50%) foram positivas para o gene stx1, sete (29,2%) para o gene stx2 e cinco (20,8%) para o gene eaeA. Em nenhuma das amostras de E. coli isoladas de mastites subclínicas nos rebanhos estudados foi detectado mais que um gene envolvido em seus fatores de virulência. Neste estudo foram encontradas 19 (79,2%) das amostras de E.coli produtoras de shiga toxina (STEC), destacando-se a maior prevalência de amostras apresentando o gene stx1, conforme também relatado por outros autores (Wani et al. 2003; Bean et al., 2004). O gene stx1 foi o mais presente dentre as 46 amostras de E. coli isoladas de casos subclínicos de mastite nos rebanhos estudados. Para a caracterização dos fatores de virulência de E.coli isoladas de mastite bovina, a técnica de PCR Multiplex, mostrou-se um método bastante rápido e específico. BIBLIOGRAFIA: BEAN, A.; WILLIAMSON, J.; CURSONS, R.T. Virulence Genes of Escherichia coli Strains Isolated from Mastitic Milk. J. Vet. Med. B-51, p. 285-287, 2004. CHINA, B.; PIRSON, V.; MAINIL, J. Typing of bovine attaching and effacing Escherichia coli by multiplex in vitro of virulence-associated genes. Appl. Environ. Microbiol. v. 62, p. 3462-3465, 1996. WANI, S.A., BHAT, M.A., SAMANTA, I., et al.. Isolation and characterization of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) from calves and lambs with diarrhoea in India. Lett. Appl. Microbiol., v. 37, p. 121 126, 2003. </font></p></td></tr></table></tr></td></table></body></html>