35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária

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ResumoID:12.722-2

AREA: Biotecnologia

PERFIL ELETROFORÉTICO DAS PROTEÍNAS DE MEMBRANA EXTERNA DE DIFERENTES SOROVARIEDADES DE LEPTOSPIRA INTERROGANS

Elaine Cristina de Castro (Escola de Veterinária da UFMG); Bárbara Nobre Lafetá (Escola de Veterinária da UFMG); Nivaldo da Silva (Escola de Veterinária da UFMG)

Resumo

Introdução:਍ഀ A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição mundial. Em animais, sua importância econômica está relacionada aos prejuízos nos sistemas de produção da pecuária leiteira e de carne, principalmente em bovinos, decorrentes dos problemas reprodutivos. Abortos e mortalidade embrionária, nascimento de bezerros fracos ou prematuros, assim como natimortalidade e mastites, são os quadros mais freqüentes. Entre as medidas de controle está imunizar os animais utilizando bacterinas polivalentes contendo as sorovariedades existentes nas propriedades ou região, uma vez que não existe uma imunidade cruzada satisfatória entre as diferentes sorovariedades de leptospira. Estudos mostram que as leptospiras possuem Proteínas de Membranas Externa (PME) envolvidas nos processos infecciosos causados por estas bactérias e que têm capacidade imunodominante. Este trabalho teve como objetivo verificar o perfil protéico da membrana externa da de diferentes sorovariedades de Leptospira interrogans por meio da técnica de eletroforese unidimensional, a fim de identificar as proteínas expressadas em maior quantidade em condições in vitro.਍ഀ ਍ഀ Metodologia਍ഀ Foi comparado o perfil eletroforético das Proteínas de Membrana Externa de Leptospira interrogans, sorovariedades icterohaemorrhagiae, pomona, wolffi e hardjobovis, através da eletroforese unidimensional (SDS-PAGE) e teste de Western blot. Foram utilizadas técnicas de extração de membrana externa utilizando detergente Triton X114 (CUNNINGHAM et al., 1988) e precipitação de proteínas a partir de acetona (HAAKE et al. 1991). A quantificação da mesma se deu por leitura da densidade ótica em espectrofotômetro. As imagens conseguidas através de SDS-PAGE e Western blot foram fotografadas por câmera digital e analisadas visualmente. Os valores foram inferidos através de comparação com Padrões de Peso Molecular conhecidos e previamente estabelecidos. ਍ഀ ਍ഀ Resultados e Discussão਍ഀ Ao analisar os resultados obtidos por SDS PAGE foram observadas 16 bandas de proteínas reagentes, sendo que as bandas de 68 kDa, LipL48, LipL41, LipL36, LipL32, LipL29 e LipL22, foram as mais evidentes em todas as sorovariedades estudadas. Nos testes de Western blot em soros de bovinos naturalmente infectados, as PME LipL41, LipL32 e LipL22 também se mostraram evidentes. Apesar dos perfis protéicos das membranas externas referentes às quatro amostras apresentaram-se muito próximos, eles não são idênticos entre si. Nem todas as proteínas que se mostraram presentes em grande quantidade na membrana externa dessas leptospiras podem ser consideradas como bons candidatos a imunógenos por não serem detectadas por Western blot, como a LipL36 e a PME de 68 kDa. ਍ഀ ਍ഀ Bibliografia:਍ഀ CUNNINGHAM,T.M.; WALKER, E. M.; MILLER, J. N. et al. Selective release of Treponema pallidum outer membrane and associated polypeptides with triton x-114. J. Bacteriol., v.170, n.12, p.5789-5796, 1988.਍ഀ HAAKE, D. A.; WALKER, E. M.; BLANCO, D. R. et al., Changes in the surface of Leptospira interrogans serovar grippotyphosa during “in vitro” cultivation. Infect. Immun., v.59, n.3, p.1131-1140, 1991.਍ഀ ਍ഀ ਍ഀ

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