35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária

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ResumoID:12.392-2

AREA: Biotecnologia

AVALIAÇÃO DA IMUNOGENECIDADE DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES DE MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE VISANDO O DESENVOLVIMENTO DE UMA VACINA DE SUBUNIDADE

Simone Simionatto ( Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Silvana Beutinger Marchioro (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Vanessa Galli (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Ronaldo Luís Pagliarini (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Cátia Silene Klein ( Centro Nacional de Pesquisa de Suínos e Aves (CNPSA/EMBRAPA), Concórdia, SC); Raquel Rebelatto (Centro Nacional de Pesquisa de Suínos e Aves (CNPSA/EMBRAPA), Concórdia, SC); Odir Antonio Dellagostin (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia)

Resumo

O Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da Pneumonia Enzoótica Suína (PES), uma doença respiratória responsável por grandes perdas econômicas. As vacinas disponíveis comercialmente não são capazes de impedir a infecção e apresentam elevado custo de produção devido ao crescimento fastidioso do M. hyopneumoniae in vitro. Desta forma, o desenvolvimento de alternativas para a profilaxia da PES é fundamental para a melhoria da sanidade dos suínos. Entretanto, o repertório de proteínas antigênicas caracterizadas e disponíveis para utilização em formulações de vacinas ou em testes de imunodiagnóstico ainda é bastante restrito. A identificação e caracterização imunológica de um número maior de proteínas antigênicas do agente podem propiciar o desenvolvimento de uma nova vacina recombinante contra PES. Este trabalho teve por objetivo a produção de proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae expressas em E. coli e avaliação de sua imunogenicidade, buscando eleger alvos potencialmente protetores para serem testados em ensaio de imunoproteção em suínos. Seqüências codificadoras (CDS) de M. hyopneumoniae foram selecionadas, amplificadas por PCR e submetidas à clonagem no vetor Champion pET200D/TOPO Hist-tag. As seqüências que continham códons TGA foram submetidas à mutação pontual, seguido da clonagem no mesmo vetor. Treze proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose (HisTrap™) carregada com níquel, usando o sistema automatizado de purificação de proteínas ÄKTAPrime (GE Healthcare). As proteínas recombinantes foram inoculadas em camundongos e o título de anticorpos sistêmicos foi monitorado por Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). O resultado obtido demonstrou que os antígenos induzem um título de anticorpos variado, o que nos permite inferir quanto à capacidade imunogênica de cada antígeno. O potencial antigênico destas proteínas recombinantes também será avaliado utilizando soros de suínos com lesões características da doença. A realização deste estudo permitirá a identificação e caracterização de novos alvos imunogênicos, contribuindo para o desenvolvimento de vacinas de subunidade, sendo, portanto, um passo importante na definição de estratégias alternativas para produção de insumos eficientes no controle da PES.

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