35º Conbravet - Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária

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ResumoID:12.392-1

AREA: Biotecnologia

PRODUÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES DE MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE EXPRESSAS EM ESCHERICHIA COLI E AVALIAÇÃO DA ANTIGENICIDADE

Simone Simionatto (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Vanessa Galli (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Silvana Beutinger Marchioro (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Ronaldo Luís Pagliarini (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Andrea Panzardi ( Laboratório de Patologia Suína, Faculdade de Veterinária, UFRGS, Porto Alegre, RS); Desirée Cigaran Schuck ( Laboratório de Genômica Estrutural e Funcional, CeBiot, UFRGS, Porto Alegre, RS); Everton Fagundes da Silva (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia); Odir Antonio Dellagostin (Universidade Federal de Pelotas-UFPel, Centro de Biotecnologia)

Resumo

A Pneumonia Enzoótica Suína (PES) é uma doença respiratória contagiosa, com ampla distribuição e causada pelo Mycoplasma hyopneumoniae. Apesar da importância da vacinação como estratégia de controle da doença, as vacinas disponíveis oferecem apenas proteção parcial e apresentam elevado custo de produção. Estudos vêm sendo desenvolvidos buscando novas alternativas para o diagnóstico e profilaxia da PES, uma vez que a mesma apresenta elevado impacto econômico, principalmente na região Sul do Brasil. Porém, o número de antígenos caracterizados até o momento é bastante restrito. Desta forma, a identificação e caracterização imunológica de um número maior de proteínas antigênicas deste agente representam um passo importante na definição de estratégias alternativas para o controle e profilaxia desta doença. Este trabalho teve como objetivo a produção de proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae em E. coli e a avaliação de sua antigenicidade. Treze alvos pertencentes a dez CDS diferentes foram selecionados, amplificados por PCR, clonados no vetor Champion pET200D/TOPO e purificadas por cromatografia de afinidade. As seqüências que continham códons TGA foram submetidas à mutagênese sítio-dirigida para substituição do códon TGA por TGG e posteriormente clonadas no mesmo vetor. As proteínas recombinantes purificadas foram avaliadas quanto ao reconhecimento por anticorpos produzidos durante a infecção natural, através das técnicas de Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) e Western blot. No ELISA todas as proteínas recombinantes foram reconhecidas por anticorpos presentes nos soros dos suínos com lesões características da doença. Estes mesmos soros foram utilizados no Western blot e somente algumas proteínas foram reconhecidas por anticorpos presentes nestes soros. O reconhecimento das proteínas recombinantes por anticorpos presentes no soro de suínos convalescentes indica que estas proteínas são expressas pela bactéria durante a infecção, tornando-as candidatas promissoras ao desenvolvimento de vacinas. A especificidade destas proteínas recombinantes com outras espécies de micoplasma também será avaliada, buscando contribuir para o desenvolvimento de testes de imunodiagnóstico. Além dos testes de antigenicidade, estas proteínas recombinantes serão avaliadas quanto ao potencial imunogênico.਍ഀ

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